最低抑菌浓度（MIC）

         体外抑菌和杀菌实验是评价抗菌药物活性的基石。最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC），是指在体外培养条件下，能够抑制病原微生物生长的最低药物浓度。

        方法：微量肉汤稀释法（CLSI标准）。即将不同浓度的受试品与含有病原体的肉汤培养基混合，在37℃下培养18~24小时，观察细菌生长情况。以最低无细菌生长的受试品浓度作为最低抑菌浓度（MIC），并以微克/毫升（μg/mL）进行记录。通过数据分析计算MIC50和MIC90。

        实验操作：制备梯度浓度药液（如0.25~512μg/mL），加入96孔板。接种菌悬液（如铜绿假单胞菌，5×10^5 CFU/mL），37℃孵育18~24h。基于酶标仪检测OD600的吸光度值，以最低无细菌生长浓度为MIC值，重复3次。注：吸取菌悬液和培养基将G排孔位（G1-G12）的正负对照补齐（6个正对照如G1-G6：100μL培养基；6个负对照如G7-G12：50μL培养基 + 50μL工作菌悬液）。

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表1. MIC实验安排示意图（96孔板）

图1. 测试结果（96孔板）

最低杀菌浓度（MBC）

         最低杀菌浓度（Minimum Bactericidal Concentration，MBC），是指能够杀灭99.9%以上病原微生物的最低药物浓度。

        方法：活菌计数法。即基于MIC实验结果，取无菌生长的孔内培养液10μL，滴加至TSA平板并用涂布棒均匀涂布。37℃孵育24小时后，计数存活菌落。MBC定义为使原始接种菌量5×10^5 CFU/mL减少≥99.9%（即存活菌≤500CFU/mL）的最低药物浓度。需设置对照验证涂布前孔内液体无残留抑菌物质干扰。通过数据分析计算MBC50和MBC90。

        实验操作：取MIC测定中无菌生长的孔内液体，均匀涂布于琼脂平板。37℃孵育24h，计数菌落。